温度梯度凝胶电泳TGGE 操作步骤：

1、去离子水仔细洗涤制胶所用玻璃板，用纸巾擦干。再用酒精棉球擦一遍，用纸巾擦干。将支持膜夹在两块玻璃板之间，用夹子夹住，放置在桌上。

2、配胶 (每块胶配 5ml) 丙烯酰胺/双丙烯酰胺储存溶液（40%，37.5: 1）：丙烯酰胺: 38.96g，双丙烯酰胺: 1.03g 溶于 100 ml 去离子水。

3、将玻璃板倾斜放置，用 1ml 的移液器将上面配置的胶慢慢灌入两玻璃板之间。将玻璃板水平放置半小时以上，使胶凝固。

4、待胶凝固后，先用手拨去没有点样孔的玻璃板。用去离子水将支持膜背面冲洗干净，用纸擦干。再揭开支持膜。

5、用 1ml 移液器在 TGGE 的温度面板（thermoblock）上加 800 μl 0.1% Triton。

6、用手抓住支持膜的两边，先将膜中部放于加热面板上，再慢慢将膜铺展开，在膜和加热面板间尽量不要形成气泡。温度梯度方向和电泳方向一致。

7、将预先准备好的样品加入上样孔中，每孔最多加 3 μl 样品。

8、在胶的两端盖上 Waterman 滤纸（buffer wick），滤纸的另一端浸入电泳缓冲液中。

9、盖上盖子，预电泳（200V，7min）。

10、预电泳快结束时（6min 50sec），暂停反应。打开盖子，揭开滤纸。在凝胶中间慢慢盖上一层塑料膜（cover film）。再将滤纸盖在胶上，然后用一块玻璃板（coverplate with sealings）压在滤纸上。

11、盖上盖子，继续电泳（200V，3h）。

12、电泳结束后，终止程序。将支持膜取出，先用去离子水冲洗一次。

13、将膜转移至固定液（10% 乙醇, 0.5% 冰醋酸）中，放置 5min。

14、将膜转移至去离子水中冲洗一次，再转移至银染液（0.2% AgNO3,用之前加入 40μl 甲醛）中，放置在摇床上摇荡，染色 10min。

15、将膜在去离子水中冲洗 2 次，转移至显色液（1.5% NaOH, 0.5% 甲醛）中。

16、待条带出现后，将膜用去离子水冲洗 3 次，拍照。