点击标题阅读全文）Bradford法测定蛋白浓度
Bradford法是一种迅速、可靠的通过染色测定溶液中蛋白浓度的方法。不过，尽管相对来说此法的干扰物质较少，但因为染料与不同的蛋白之间的相互作用强弱不同，因此并不能算作一种特别严格的定量方法。
所需时间： 10min
优点： 1） 快速（反应时间尽2min）；
2） 敏感，几乎没有蛋白损失。
缺点： 1） 对不同蛋白质反应不同；
2） 此法引起蛋白质不可逆的变性。
灵敏度范围： 25μg/ml~200μg/ml，最小测量体积0.1ml，最小测量蛋白量2.5μg。
原理：此法基于考马斯亮蓝G-250有红、蓝两种不同颜色的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下，可配成淡红色的溶液，当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465~595nm处有最大光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系。
试剂：考马斯亮蓝G-250染料、蛋白标准品BSA、95%乙醇、85%磷酸
溶液配制：
Bradford储存液：100ml 95%乙醇；200ml 88%磷酸；350mg Serva G 蓝
Bradford工作液：425ml双蒸水；15ml 95%乙醇；30ml 88%磷酸；30mlBradford储存液
注意事项：
1. 在反应5min后充分显色，但10~15min后开始出现沉淀，尤其是高浓度蛋白质溶液在酸性条件下易发生沉淀。所以应该在10min之内测完样品。
2. 推荐使用一次性塑料比色杯，因为比色杯壁着色后很难洗干净。
3. 如果使用玻璃比色杯，可以先用甲醇冲洗，然后用玻璃制品清洁剂洗涤，最后用水或丙酮冲洗，或者在浓盐酸中浸泡过夜。
公司推荐： Bio-Rad、Thermo
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