使用Ni亲和层析柱纯化蛋白时需要注意的事项
1. 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如：NH4，甘氨酸，精氨酸，Tris，等等；
2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂，如EDTA，EGTA，等等；
3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如DTT，防止二价Ni被还原；
4. 不能含离子型的去垢剂，比如SDS，防止Ni流失；
5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶抑制剂，比如0.1-1mM的PMSF，防止目的蛋白被降解；
6. 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达50%（v/v）
7. 应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质；
8. 缓冲液里NaCl的浓度应在300mM到2M之间；
9. 可加入变性剂促溶，盐酸胍（最高可6M），尿素（最高可8M）
10.可加入非离子型去垢剂，如Triton，Tween，NP40等，最高2%，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染；
附几篇Ni亲和层析的手册：
nual_5prime_1048474_072007.pdf
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